1 培养基
分离淋球菌一般选用营养丰富的选择性培养基。常用的选择性培养基有改良的Thayer-Martin (T-M) 培养基、含抗生素的血液琼脂或巧克力琼脂培养基。可购买商品化的培养基或实验室自配，培养基应密 封在塑料袋中，于4℃冰箱贮存，贮存时间不应超过3周，时间过久则分离率降低。分述如下：
1.1 Thayer-Martin(T-M)培养基
1) 成分。包括 GC 基础培养基，血红蛋白粉，VCNT 抑菌剂（含万古霉素、多粘菌素、三甲氧 苄胺嘧啶和制霉菌素），Iso-Vitalex 增菌剂。
2) 配制方法。以配制 500 mL 培养基为例，步骤如下：
● 称取 GC 琼脂粉 18 g，置一烧瓶中，加 235 mL 蒸馏水，摇匀后置沸水浴 15 min～30 min， 使琼脂完全溶解；
● 称取血红蛋白粉 5 g，加于乳钵内，用 250 mL 蒸馏水分次研磨溶解后，置沸水浴 15 min～ 30 min；
● 将上述两种溶液置于 121℃高压灭菌 15 min，冷却至 50℃，在无菌条件下将血红蛋白 溶液缓慢加入到琼脂液内，弃去可能存在的血红蛋白沉渣；
● 取 1 小瓶 Iso-Vitalex 增菌剂，用所附的一小瓶稀释液溶解后加入到步骤 3 所配的混 合液中，边加边摇；
● 取一小瓶 VCNT 抑菌剂，用 5 mL 无菌蒸馏水溶解后加入到步骤 4 所配的混合液中，边 加边摇；
● 在无菌条件下将配好的培养基分装入无菌平皿中，待凝固后，用塑料袋封存，置 4℃ 冰箱保存备用。
1.2 GC 血液琼脂培养基
1) 成分。包括 GC 基础培养基和脱纤维羊血。
2) 配制方法：以配制 500 mL 培养基为例，步骤如下：
● 取 GC 琼脂粉 18 g，置一烧瓶中，加 450 mL 蒸馏水，摇匀后置沸水浴 15 min～30 min， 使琼脂完全溶解；
● 将 GC 琼脂溶液置于 121℃高压灭菌 15 min，冷却至 50℃；
● 在无菌条件下将 50 mL 脱纤维羊血（羊血在临用前置 37℃水浴预热）加入到琼脂溶液 中，摇匀后分装于无菌平皿中，待凝固后，置塑料袋封存，置 4℃冰箱保存备用。
1.3 Amies运送培养基(含活性炭)
1) 成分。活性炭 5 g，氯化钠(NaCl)1.5 g，磷酸氢二钠(Na2HPO4)0.575 g，磷酸二氢钾 (KH2PO4)0.1 g，氯化钾(KCl)0.1 g，硫代乙酸钠 0.5 g，氯化钙(CaCl)0.05 g，氯化镁 (MgCl)0.05 g，琼脂 2 g，蒸馏水 500 mL。
2) 配制方法：以配制 500 mL 培养基为例，步骤如下：
● 将各种成分加到 500 mL 蒸馏水中，充分混合；
● 121℃高压灭菌 15 min，冷却至 50℃，然后分装于小管中，每管 6 mL。在分装时，不 时摇动混匀琼脂，以使活性炭末处于均匀混悬状态；
● 置 2℃～8℃可储存 6 个月。
2 接种标本
取材后标本应尽可能及早接种。培养基应先置于室温中预温。将取材的拭子转动涂布于平皿的上1/4 范围，然后用接种环分区划线，以保证获得较纯的单个菌落。
3 培养条件
接种标本后，立即将平皿置于(36±1)℃，含5％～10％ CO2，湿润（70％湿度）的环境中培养。淋 球菌为需氧菌，但初代分离需要CO2 。CO2环境可由CO2培养箱、CO2产气袋或烛缸提供。使用烛缸时，应使用白色、无芳香味的无毒蜡烛。在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。
4 观察结果
培养24 h后检查平皿，此时没有菌生长的平皿应继续培养至72 h，仍无菌生长才可丢弃，做出淋球菌培养阴性的报告。因为某些菌株，如AHU-营养型菌株生长缓慢，且菌落小。如果培养时间不足72 h， 它们可能会被忽略。对选择性培养基上分离的可疑菌落应做进一步鉴定。
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